流程式分析儀(以流式細胞分析儀為例)的標準操作規程涵蓋開機準備、運行監控、關機維護等全流程,需嚴格遵循參數設置、樣品處理、安全防護等規范,以下為具體操作步驟及注意事項:
一、開機前準備
環境檢查
確保實驗室環境符合要求,如溫度18-25℃、濕度40%-60%、通風良好。
檢查電源、氣源(如鞘液、壓縮空氣)是否正常,避免電壓波動或氣源污染。
儀器狀態檢查
檢查儀器外觀是否完好,管路連接是否牢固,無泄漏或堵塞。
確認鞘液桶液位充足(通常八分滿),廢液桶為空且桶蓋旋緊。
檢查液流過濾器,排除氣泡,確保液流穩定。
試劑與樣品準備
使用符合分析純(AR)或更高純度的試劑,如熒光抗體、溶血素等。
樣品需根據實驗要求預處理,如全血需抗凝處理,細胞培養液需過濾去除雜質。
二、開機與預熱
開啟儀器
依次打開穩壓電源、變壓器、流式細胞儀電源及周邊設備(如打印機、計算機)。
啟動儀器后,等待預熱至穩定狀態(通常需30分鐘),確保激光、液流等系統正常運行。
質控程序
運行質控樣品(如熒光微球),驗證儀器靈敏度、分辨率及補償是否合格。
若質控失敗,需檢查試劑、管路或儀器狀態,重新校準后方可進行實驗。
三、樣品分析與運行
參數設置
根據實驗需求設置激光功率、熒光通道、流速、采集時間等參數。
設置閾值以排除背景噪聲,確保信號準確性。
如需多色熒光分析,需進行補償調節,避免熒光溢出干擾。
樣品進樣
將處理好的樣品(如標記熒光的細胞懸液)注入進樣管,確保無氣泡或沉淀。
啟動進樣程序,觀察液流是否穩定,避免堵塞或泄漏。
數據采集與監控
運行實驗時,實時監控細胞圖譜、數據及儀器狀態(如壓力、溫度)。
若出現異常(如基線漂移、液流中斷),需立即停止實驗并排查原因。
四、實驗結束與關機
數據保存與分析
實驗結束后,自動生成報告并保存原始數據(如FCS文件)。
使用專業軟件(如CytExpert、FlowJo)進行數據分析,包括細胞分群、統計等。
儀器清洗與維護
用蒸餾水或專用清洗液沖洗管路,避免殘留樣品或試劑腐蝕儀器。
清潔儀器表面及進樣口,更換污染的濾芯或管路。
定期校準儀器(如每月一次),確保性能穩定。
關機程序
依次關閉儀器電源、周邊設備及穩壓電源。
填寫《儀器使用記錄》,記錄實驗內容、儀器狀態及維護情況。
五、安全注意事項
個人防護
操作時佩戴實驗服、手套及護目鏡,避免接觸有毒試劑或激光。
廢液及樣品需按生物危害標準處理,防止交叉污染。
儀器安全
避免高壓或高溫部件直接接觸,防止燙傷或電擊。
定期檢查儀器接地情況,確保電氣安全。
應急處理
若發生試劑泄漏或儀器故障,立即停止實驗并疏散人員。
按照實驗室應急預案處理,如使用滅火器、吸附材料等。